犬细小病毒感染的研究现状

热度271票  浏览36次 时间:2016年7月10日 11:17

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犬细小病毒感染(Canine parvovirus infection)是由犬细小病毒(CPV)引起的犬的一种急性传染病,以严重肠炎综合征为特征的犬科和鼬科动物的重要传染病。我国于 1982 年由梁士哲等证实此病后,在东北、华东和西南等地区的警犬和良种犬中陆续发生和蔓延[1~3]。特别是该病于 2001 年广泛流行,给养犬业造成了极大的危害。CPV感染是犬科动物最常见的、最主要的病毒性疾病之一,是食肉动物细小病毒的典型代表[4,5]。笔者就近年来我国CPV感染的研究现状综述如下。中国宠物医师网O6g@,n~

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ofWJ3x^)~#e8|8z01 病原学 CPV属于细小病毒科、细小病毒属。CPV具有本属病毒的典型形态和结构,粪便中负染的病毒颗粒外观呈圆形或六边形,直径约 20 mμm,呈 20 面体对称, 无囊膜,由 32 个颗粒组成,基因组为单股线状DNA, 大小为 5233 bp,在DNA两端各有一个发夹样的回纹结构。病毒粒子有VP1、VP2、VP3 3 种多肽,其中VP2为衣壳蛋白主要成分,有血凝性[1~3]。 CPV具有较强的血凝活性,病毒在 4℃ 和 25℃ 都能凝集猪和恒河猴的红细胞,但不能凝集其它动物的红细胞,这一特性可作为病毒鉴定的参考指标[1,2]。 已报道发现了CPV抗原漂移的变异株,对猪和恒河猴的红细胞无血凝性和丢失了与猫泛白细胞减少症病毒抗原相关性的特性[1]。杨得威等分离得到 1 株新型犬细小病毒株HN1,HN1基因组成部分序列,测定结果显示与犬细小病毒株CPVN株的VP2基因抗原域序列有 85% 以上的同源性。人工攻毒发现能导致犬肺病变,是世界首例能引起犬细小病毒的报道[6]。CPV可在多种不同类型的细胞内增殖,但目前通常用MDEK和 F81 等传代细胞分离培养病毒[1~3]。由于其无囊膜、不含脂类和糖类、结构坚实致密等特点,CPV对外界理化因素抵抗力非常强。粪便中的CPV可存活数月至数百年, 室温下可存活 90 d,在pH值 3~9 和 56℃ 条件下至少能稳定 1 h。紫外线、福尔马林、β-丙内酯、次氨酸钠、氨水和氧化剂能使之灭活,但CPV对乙醚、氯仿、醇类和去氧胆酸盐有抵抗力[3,7,8]。中国宠物医师网'hr+Rdgt

.jZ#y2pF:h$H4cs4@1Y02 流行病学 CPV主要感染犬,也可见于貂、狐、狼等其他犬科动物和鼬科动物。各种年龄、性别和品种的犬均易感染,但小犬的易感性高,断乳前后的子犬易感性最高,其发病率和死亡率都高于其他年龄组,往往以同窝暴发为特征。3~4 周龄犬感染后呈急性致死性心肌炎的为多,8~10 周龄的犬则以肠炎为主,小于 4 周龄的子犬和大于 5 周龄的老犬发病率低[1,3]。王景秋等调查发现本病多发于小型宠物犬,且以洋种犬为多,2~5月龄为高发病期,本病全年均有发生,但相对集中在2~6 月份[10]。饲养管理条件骤变、长途运输、寒冷拥挤等均可促使本病发生。感染犬是本病的主要传染源, 感染后 4 d 通过粪便等向外界排毒,病毒离子散在,传染性最强,7~10 d 后由于肠黏膜分泌的IgA和随出血进入肠道中的血液IgM特异性抗体的增多,病毒被凝集在一起,感染性降低;康复犬也可作为传染源,仍可长期通过粪便排毒,这也是本病能广为流行的原因之一。中国宠物医师网"n c$s+{$a;~

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3 临床症状 潜伏期随动物机体的自身免疫力和所感染病毒的毒力与数量而不同,一般为 7~14 d,病毒侵入后在感染的头 2 d,病毒在咽喉部复制,3~5 d 后出现病毒血症。研究表明,单纯细小病毒感染,一般症状较轻,由于混合细菌感染或继发感染而表现出明显的临床症状,多数呈肠炎综合征,少数呈心肌炎综合征,也有报道在 1 个犬身上兼有 2 型症状的。CPV还经常与其他病毒,特别是与引起肺病变的犬瘟热一起形成混合感染[1,3,6,8]。中国宠物医师网} w6[)O!U v%O#v$KJ

{p+Ng*m bZ03.1 肠炎型 潜伏期 1~2 周,多见于青年犬。本型的特征症状是呕吐、腹泻、便血、白细胞显著减少,在病程的早、中、晚期表现各不相同。早期:多数犬体温升高达 40℃~41℃(少数犬体温正常),精神不振,采食量减少或绝食,呕吐食物及黄白色泡沫状液体,排便次数增多,大便正常或稍带黏液,1~2 d 后进入中期症状。中期:食欲废绝,频繁呕吐和剧烈腹泻,多数犬呈喷射状排出番茄汁样粪便,带有血液,发出特别难闻的腥臭味,少数犬黏液便呈黄色或乳白色果冻样;极少数犬呈间歇性腹泻。后期:病犬迅速脱水,眼窝下陷,皮肤弹性降低,可视黏膜苍白,舌面皱缩,最后因水、电解质平衡失调,并发酸中毒而于数小时至 2 d 死亡。病程短的 4~5 d,长的 1 周以上。成年犬发病一般不发热[1,8,11~13]。血液学检查发现,白细胞总数明显减少,尤其在发病后 4~5 d 最为明显,常降至 3000 个/mm3 下。如果继发感染,白细胞总数可增高[7,13]。&t;Yh{ cb0

(@p5JUrCIh03.2 心肌炎型 多见于流行初期或缺乏母源抗体的 4~6 周龄幼犬。发病初期精神尚好或仅有轻度腹泻,个别病例有呕吐。常突然发病,表现为可视黏膜苍白、衰弱、呻吟、干咳,呼吸极度困难。听诊时心有杂音,心率不齐。心电图R波降低,S-T波升高。常因急性心力衰竭而死亡,只有极少数轻度病例可以治愈,致死率为 60%~100%[1,3,7,8]。 4 病理学 病理变化随病程长短、临床病型和继发感染的种类与程度不同而异。中国宠物医师网$M-\(])k2\T(d

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I04.1 肠炎型 剖检可见腹部蜷缩、腹腔积液。病变主要见于空肠、回肠(即小肠中、后段),血液黏稠暗紫,严重时肠管外观紫红,浆膜下充血出血,黏膜坏死、脱落,肠管扩张,内容物水样,混有血液和黏液,肠系膜淋巴结充血、出血、肿胀。组织学检查,肠炎综合征的最突出变化是小肠隐窝上皮坏死脱落,固有层有充血、出血和炎性细胞浸润,绒毛萎缩,隐窝肿大,数目减少[1,2,3,7]。nl'W.M aj0

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4.2 心肌炎型 剖检病变主要限于肺和心脏。肺水肿,局灶性充血、出血,致使肺表面色彩斑驳。心脏扩张,心房和心室内有瘀血块。心肌和心内膜有非化脓性坏死灶。心肌纤维严重损伤,常见出血性斑纹。组织学特征为心肌纤维的弥漫性淋巴细胞浸润,间质水肿与局限性心肌变性,在病变的心肌细胞中有时可发现包涵体和CPV粒子[1,3,7,12]。中国宠物医师网/k,l.g4A!K+qD`

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5 诊断学 根据特征性临床症状(先呕吐后急性出血性肠炎,白细胞显著减少以及幼犬急性心肌炎等),再结合流行病学和病理变化的特点,可以作出初步诊断。但由于肠炎型犬瘟热、犬冠状病毒、轮状病毒感染以及某些细菌、寄生虫感染和急性胰腺炎,也常出现肠炎综合征,所以诊断时一定要注意鉴别[1,3,8]。Mv2`weH&@0

#Wo/D8^-Q)UBA;Y;P05.1 电镜和免疫电镜观察 采集患犬粪便,进行氯仿处理后低速离心,取上清液进行负染后电镜观察,在病初期可见大量直径 20 mμm 圆形或六边形的病毒粒子。在病的后期,由于肠黏膜分泌性抗体的出现,常可见到大块聚集状态的病毒粒子,效果欠佳,而许树林等探索测定出了使犬细小病毒免疫电泳复合物中抗原体解离的物理振荡、电解度浓度、缓冲液pH值及作用温度的条件,从而使免疫复合物中的抗原抗体解离,为应用对流免疫电泳方法对犬PCV免疫复合物中抗体的检测奠定了基础[1~3,8,14]。5^}n+S0\)a?0

f*n fwI:T`05.2 病毒分离鉴定 对于新疫区或为了对流行毒株进行研究比较可采用此法。最简便的病毒鉴定方法是接种 3~5 d 用荧光抗体检测细胞中的病毒或测定培养液的血凝性[1~3]。"B1F)p!g;p7N$H]0

r%j&B%x[%s05.3 血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验 在发病早期,可取病犬细胞培养物和粪便进行HA试验。在发病后期,由于IgM等抗体的出现,使CPV抗原失去血凝性。此时,用二巯基乙醇(2-ME)处理,便可检查到粪便中的IgM等抗体和CPV抗原[1~3]。中国宠物医师网#MXc,K!tn;f&h#Lh

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5.4 酶联免疫吸附试验 采用双抗体法,应用特制的酶标反应小管、板或纤维素膜。国内外已研制出多种试剂盒。田可恭等用CPV单克隆酶标抗体制成CPV快速诊断盒,可在 2 h 内检出粪便中的CPV抗原[3]。q

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+[.H\1b_1g*I05.5 PCR诊断技术 刘忠华等研制的PCR诊断试剂盒能检出痕量(10 ng)的犬细小病毒DNA,被测样品只需进行简单煮沸就能进行PCR反应,而且此试剂盒具有灵敏、特异等优点[15]。此外,还可利用核酸探针技术对CPV进行探测。中国宠物医师网9A-K,}p5^9R

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6 免疫防治研究~$iR,I%K'u2O7et0

q(fL%JIH X06.1 生物制品研究现状 我国目前用于预防CPV感染的疫苗有同源和异源性灭活苗和弱毒苗 2 类。异源苗是指猫泛白细胞减少症(FPV)灭活苗或弱毒苗。现在,基因工程苗的研究较多。国内目前多倾向使用CPV灭活苗或弱毒苗,主要有单苗、二联苗、三联苗和五联苗[1,3]。陈云等用本地CPV强毒株接种基础免疫犬,制备特效高免血清,高免血清CPV抗体效价高达 1:23040,临床治愈率达 94.4%,安全可靠,适于临床推广应用[16]。李六金等用犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白注射液对犬细小病毒性肠炎进行治疗,取得良好效果[17]。付少才等用抗犬细小病毒单克隆抗体对病犬进行治疗,也取得一定的效果[9]。以上这些研究,为我国防治PCV的兽医生物制品的开发展示了广阔的前景。;G0@hR/O0

&P7_p;H+r2dr`0RL06.2 免疫预防 平时严格兽医卫生防疫措施,坚持进行免疫注射,但免疫的程序与时机等因素都会影响幼犬的免疫效果。CPV感染的最低抗体保护值为 1:80。 对无母源抗体或不知母源抗体水平的或抗体水平很低的仔犬建议用以下免疫程序:首免 5 周龄,二免 8~9周龄,三免 12~13 周龄,四免 15~16 周龄;对母源抗体较高的仔犬免疫程序:首免断奶时,二免 12~13周龄,三免 15~16 周龄,以后每年免疫 1 次。对成年犬首次免疫共注射 2 次,每次间隔 3~4 周,以后每年加强免疫 1 次。母犬可在产前 3~4 周免疫接种[18]。以产仔前 1 个月用灭活苗对母犬免疫,所生仔犬 60 日龄首免,75 日龄加强免疫,以后间隔 6 个月免疫 1 次效果最佳,该程序对犬的保护率为 100%[19]。杨得威等对CPV弱毒疫苗、灭活疫苗、CPV抗原抗体复合物、CPV PIREsneo/VP2基因DNA疫苗进行比较,结果发现CPV抗原抗体复合物疫苗的效果最佳[20]。对有可能处于潜伏期的动物,须先注射高免血清,观察 1~2 周无异常时,再按免疫程序免疫。污染的病犬舍须在彻底消毒并空舍 1 个月后,方可启用。中国宠物医师网%w^#a3m)L-e;A

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6.3 治疗 CPV感染心肌炎综合征型病例常来不及救治即死亡,肠炎综合征型病犬及时合理治疗,可明显降低死亡率。R+R;a })u,OBS0

7N0C9Uu;Wn&m-xVs06.3.1 对症治疗 止吐、止泻、止血、解除酸中毒。中国宠物医师网G^x)@ek}w7]z

$V.o![DX06.3.2 支持疗法 通常在糖盐水中加入Vc、ATP、K等。加入葡萄糖酸钙可防止纠正酸中毒时低钙抽搐的发生。周国基用康复犬犬血和母体血输血对CPV感染进行治疗,效果显著。中国宠物医师网

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6.3.3 特异疗法 早期使用高免血清、CPV单克隆抗体、免疫球蛋白、干扰素等都有良好的效果。中国宠物医师网2_%{$WCIZ0xc

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6.3.4 控制继发感染 可用庆大霉素、氨苄青霉素等。 O#^-b"z*rP;AW

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'EPh:\E{)f0ID|6[7`q06.3.5 中药疗法 根据本病暴泻,属肠湿热、邪伤脉络之急症,以清热解毒、渗湿、敛肠为治疗原则,选用地榆、槐花汤等。 另外,王海涛等用直肠投药法结合输液疗法取得了良好效果[1,3,11,13,21~23],值得借鉴。#za6f*p*M\0

j]O2qACC!U0祝兴林 何剑斌 赵玉军 刘永华 李绍龙 (沈阳农业大学畜牧兽医学院 辽宁 沈阳 110161)i_+h4fy:jPn5i*O!ke0

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